技术文章：高纯质粒中提试剂盒
 

　　一、运输与存储条件。

　　1. RNase A低温运输，-20 ℃长期保存，使用时加入Buffer P1中，2-8 ℃保存，有效期6个月。

　　2. 磁珠保存于4 ℃，严禁冻存。

　　3. 其它组份常温运输与保存。

　　4. 有效期12个月。

　　二、注意事项(请使用试剂盒前阅读此注意事项)。

　　1. 磁珠4 ℃保存，严禁冻存，否则失效。使用前请充分混匀。

　　2. 质粒提取量与细菌浓度及质粒拷贝数等因素有关，低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒提取时应加大细菌使用量。

　　3. 使用70 ℃预热的 Elution Buffer D 或 ddH2O 洗脱质粒 DNA，可以提高洗脱效率。

　　4. 新转化的感受态细菌可以提高质粒DNA产量。

　　5. 洗脱体积不应小于0.5 mL，否则降低DNA洗脱效率。

　　6. 第一次实验时请先将P1(重悬液)中加入RNase A，Buffer W3(漂洗液)中加入规定体积的无水乙醇。

　　7. 质粒DNA的OD260/OD280的正常范围是1.7-1.9(用ddH2O溶解)或1.8-2.0(用Elution Buffer D溶解)，比值大于2.0，为RNA污染，而比值小于1.7，则为蛋白污染。

　　8. 为了您的健康，实验过程中请穿好实验服、佩戴手套和安全眼镜。

　　三、产品简介。

　　本产品是一款利用磁珠作为分离介质，从工程菌内高效分离质粒DNA的试剂盒，可在20~50 ml菌液中提取100~300 μg的高纯度质粒DNA，用于转染和酶切等生物学实验。

　　四、特点与优势。

　　1. 可有效去除蛋白质与RNA，得到高纯度的质粒DNA。

　　2. 本试剂盒中的磁珠为高密度基团修饰磁珠，300 μL磁珠可结合100-300 μg的质粒DNA。

　　五、使用说明。

　　1. 试剂配制：

　　a) Buffer P1 (重悬液) 配制。将RNase A全部加入Buffer P1中，混匀，4 ℃保存。

　　b) Buffer W3(漂洗液)配制。溶液中加入35 ml无水乙醇，混匀。

　　2. 细菌收集。收集20-50 ml菌液，12,000×g离心2 min，弃上清，将离心管倒立在纸巾上，吸尽残余液体，以免影响后续实验。

　　3. 加入2.5 ml Buffer P1(请检查是否加入RNase A)，振荡(Vortex)至细菌完全重悬。(若细菌沉淀没有完全重悬，会影响裂解效果，降低质粒DNA提取量。)

　　4. 加入2.5 ml Buffer P2(室温较低时，Buffer P2易沉淀，请在37℃水浴锅中加热10 min，待沉淀消失后再使用)，轻柔地上下翻转20次，液体变透明，保证细菌充分裂解。

　　(不要剧烈震荡(Vortex)，以免DNA断裂。裂解时间不宜超过5 min，以免质粒DNA受到破坏。细菌充分裂解后液体变得清亮粘稠。如果仍然浑浊，则细菌过量，裂解不彻底，应加大裂解液用量。)

　　5. 加入3.5 ml Buffer P3，立即温和地上下翻转20次，充分混匀，出现白色絮状沉淀。(混匀要充分，以免出现局部沉淀，影响中和效果。)

　　6. 12,000×g离心10-20分钟，上清转入15 ml 离心管中。(尽量避免吸取白色沉淀)

　　7. 加入300 μL磁珠(吸取磁珠前，请震荡混匀)，置于静音混合器中室温孵育10-30 min，完成DNA吸附。

　　8. 将离心管置于磁力架上，使磁珠凝集，或5000×g离心2 min，沉淀磁珠，弃上清。

　　9. 加入1 ml Buffer W1(去蛋白液)，轻轻震荡10 sec，磁力法或离心法沉淀磁珠，弃上清。

　　10. 加入1 ml Buffer W3(漂洗液，请先检查是否加入无水乙醇)，轻轻震荡10 sec，磁力法或离心法沉淀磁珠，弃液体。

　　11. 8,000×g离心2 min，尽量吸取磁珠中残余液体，保留磁珠沉淀。

　　12. 加入0.5 ml Elution Buffer D或ddH2O(70 ℃预热，洗脱效果会更好)，剧烈震荡(Vortex)30-60 sec，磁力法或离心法沉淀磁珠。

　　13. 上清液转入过滤柱，12,000×g离心2分钟，弃过滤柱，滤液即为质粒DNA溶液。

　　14. 测定质粒DNA浓度，或置于-20 ℃冰箱中保存。

　　六、质粒DNA提取效果鉴定。

　　高纯质粒中提试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。