技术文章：四重荧光染色试剂盒(四标五色)
 

　　原理：利用二抗标记的 HRP，催化 TYR 荧光探针反应结合至抗原蛋白周围分子上，共价标记蛋 白上，运用 HRP 二抗及一抗在微波热修复条件下脱离掉抗原失活的原理，重复此过程，即可实现同 种属荧光双标及荧光三标以及多标(备注：此过程仅适合石蜡切片的荧光多标)。此试剂盒中的荧光 探针可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标或荧光放大等功能，极大丰富了此试剂盒的内 涵。

　　试剂盒组成：TYR-488 反应液(绿光)(1mL),-20℃;TYR-CY3 反应液(红光)(1mL)，-20℃;TYR- 594;TYR-CY5 反应液(1mL)，-20℃ 高敏多聚 hrp 山羊抗兔二抗(4mL) 4℃。 备注：TYR-488 反应液/TYR -CY3 反应液/TYR-594/TYR-CY5 反应液在-20 度 下 ，均为固体，使用之前需解冻。

　　试剂盒操作流程：

　　1 对于石蜡切片，脱蜡至水。

　　2 合适的抗原修复液修复(修复类型必须为抗原热修复)，3%H2O2 封闭，2%BSA-PBS 封闭，孵育一 抗，孵育 HRP 二抗。加入 50-200ul/ TYR-488/TYR -CY3/TYR-594/TYR-CY5 反应液反应 室温 反应 10~15min.

　　3 重复步骤。

　　4 四标完成后，染 dapi 细胞核。

　　5 防荧光淬灭封片剂封片。

　　6 选择合适激发吸收波长通道荧光拍照。

　　基于TSA技术的mIHC(多重荧光免疫组化) 原理

　　利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。

　　然后微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。

　　四重荧光染色试剂盒(四标五色) 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。