实验室之琼脂糖凝胶电泳原理和操作注意事项
 

　　琼脂糖凝胶电泳原理和操作注意事项：

　　荧光染料检测核酸的存在

　　观察琼脂凝胶中核酸的最简单方法是利用荧光染料溴化乙锭 (EB) 进行染色，所用的荧光染料含有一个可以嵌入核酸的堆积碱基之间的荧光基团，当染料与核酸结合后呈现荧光。

　　核酸吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，被结合的染料本身在302nm和366nm有光吸收，这两种情况下，被吸收的能量可在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来，因此，当凝胶中含有游离的EB时即可以检测到DNA和RNA的存在。

　　注1：由于EB具有很强的毒性，因此在操作时一定要戴手套，并且最好有专门的区域进行电泳检测实验。

　　注2：可以使用GoldView染料代替EB，其具有相同的检测效果，同时毒性要低很多

　　电泳区分核酸大小：

　　核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，因此跑的速度不同，琼脂糖凝胶电泳即根据这个原理对核酸进行区分。

　　核酸分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于核酸的戊糖-磷酸骨架在结构上具有重复性，长度相同的核酸链几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速率向正极方向移动。

　　此外，含有琼脂糖的凝胶具有网状结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，因此在琼脂糖凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。

　　在同样电场的强度下，核酸分子的迁移速度取决于核酸分子本身的大小和构型以及琼脂糖凝胶的浓度，简而言之，分子量较大的核酸迁移速度较慢，分子量较小的核酸迁移速度较快，这就是应用凝胶电泳技术分离核酸片段的基本原理。

　　琼脂糖凝胶电泳上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。