实验室常用培养基的配制方法有哪些?
 

　　培养基的配制方法

　　Ampicillin

　　(100 mg/ml)

　　组份浓度 100 mg/ml Ampicillin

　　配制量 50 ml

　　配制方法 1. 称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中。

　　2. 加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。

　　3. 用 0.22 μm 滤器过滤除菌。

　　4. 小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。

　　IPTG

　　(24 mg/ml)

　　组份浓度 24 mg/ml IPTG

　　配制量 50 ml

　　配制方法 1. 称量 1.2 g IPTG 置于 50 ml 离心管中。

　　2. 加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml。

　　3. 用 0.22 μm 滤器过滤除菌。

　　4. 小份分装(1 ml/份)后，-20℃保存。

　　X-Gal

　　(20 mg/ml)

　　组份浓度 20 mg/ml X-Gal

　　配制量 50 ml

　　配制方法 1. 称量 1 g X-Gal 置于 50 ml 离心管中。

　　2. 加入 40 ml DMF(二甲基甲酰胺)，充分混合溶解后，定容至 50 ml。

　　3. 小份分装(1 ml/份)后，-20℃避光保存。

　　LB 培养基

　　组份浓度 1%(W/V)Tryptone，0.5%(W/V)Yeast Extract，

　　1%(W/V)NaCl

　　配制量 1 L

　　配制方法 1. 称量下列试剂，置于 1 L 烧杯中。

　　Tryptone 10 g

　　Yeast Extract 5 g

　　NaCl 10 g

　　2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 ml)，调节 pH 值至 7.0。

　　4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。

　　5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　LB/Amp 培养基

　　 组份浓度 1%(W/V) Tryptone

　　0.5%(W/V) Yeast Extract

　　1%(W/V) NaCl

　　0.1 mg/ml Ampicillin

　　配制量 1 L

　　配制方法 1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。

　　Tryptone 10 g

　　Yeast Extract 5 g

　　NaCl 10 g

　　2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 ml)，调节 pH 值至 7.0。

　　4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。

　　5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。

　　6. 加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。

　　7. 4℃保存。

　　TB 培养基

　　组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone

　　2.4%(W/V) Yeast Extract

　　0.4%(V/V) Glycerol

　　17 mM KH2PO4

　　72 mM K2HPO4

　　配制量 1 L

　　配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)

　　100 ml。

　　溶解 2.31 g KH2PO4和 12.54 g K2HPO4于 90 ml 的去

　　离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。

　　2. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。

　　Tryptone 12 g

　　Yeast Extract 24 g

　　Glycerol 4 ml

　　3. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　4. 加去离子水将培养基定容至 1 L，高温高压灭菌。

　　5. 待溶液冷却至 60℃以下时，加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液。

　　6. 4℃保存。

　　TB/Amp 培养基

　　组份浓度 1.2%(W/V) Tryptone

　　2.4%(W/V) Yeast Extract

　　0.4%(V/V) Glycerol

　　17 mM KH2PO4

　　72 mM K2HPO4

　　0.1 mg/ml Ampicillin

　　配制量 1 L

　　配制方法 1. 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4)

　　100 ml。

　　溶解 2.31 g KH2PO4和 12.54 g K2HPO4于 90 ml 的去离子水中，搅拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，高温高压灭菌。

　　2. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。

　　Tryptone 12 g

　　Yeast Extract 24 g

　　Glycerol 4 ml

　　2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 加去离子水将培养基定容至 1 L 后，高温高压灭菌。

　　4. 待溶液冷却至 60℃以下时，加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液和 1 ml 的 Ampicillin(100 mg/ml)。

　　5. 均匀混合后 4℃保存。

　　SOB 培养基

　　组份浓度 2%(W/V) Tryptone

　　0.5%(W/V) Yeast Extract

　　0.05%(W/V) NaCl

　　2.5 mM KCl

　　10 mM MgCl2

　　配制量 1 L

　　配制方法 1. 配制 250 mM KCl 溶液。

　　在 90 ml 的去离子水中溶解 1.86 g KCl 后，定容至 100ml。

　　2. 配制 2 M MgCl2溶液。

　　在90 ml 去离子水中溶解19 g MgCl2后，定容至100 ml，高温高压灭菌。

　　3. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。

　　Tryptone 20 g

　　Yeast Extract 5 g

　　NaCl 0.5 g

　　4. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　5. 量取 10 ml 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中。

　　6. 滴加 5 N NaOH 溶液(约 0.2 ml)，调节 pH 值至 7.0。

　　7. 加入去离子水将培养基定容至 1 L。

　　8. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　9. 使用前加入 5 ml 灭菌的 2 M MgCl2溶液。

　　SOC 培养基

　　组份浓度 2%(W/V) Tryptone

　　0.5%(W/V) Yeast Extract

　　0.05%(W/V) NaCl

　　2.5 mM KCl

　　10 mM MgCl2

　　20 mM 葡萄糖

　　配制量 100 ml

　　配制方法 1. 配制 1 M 葡萄糖溶液。

　　将 18 g 葡萄糖溶于 90 ml 去离子水中，充分溶解后定

　　容至 100 ml，用 0.22 μm 滤器过滤除菌。

　　2. 向 100 ml SOB 培养基中加入除菌的 1 M 葡萄糖溶液 2ml，均匀混合。

　　3. 4℃保存。

　　2×YT 培养基

　　组份浓度 2%(W/V)Tryptone，0.5%(W/V)Yeast Extract，

　　0.5%(W/V)MgSO4·7H2O

　　配制量 1 L

　　配制方法 1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。

　　Tryptone 20 g

　　Yeast Extract 5 g

　　MgSO4·7H2O 5 g

　　2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 滴加 1 N KOH，调节 pH 值至 7.5。

　　4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。

　　5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　NZCYM 培养基

　　组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract

　　0.1%(W/V) Casamino Acid

　　1%(W/V) NZ 胺

　　0.5%(W/V) NaCl

　　0.2%(W/V) MgSO4·7H2O

　　配制量 1 L

　　配制方法 1. 称取下列试剂，置于 1 L 烧杯中。

　　Yeast Extract 5 g

　　Casamino Acid 1 g

　　NZ 胺 10 g

　　NaCl 5 g

　　MgSO4·7H2O 2 g

　　2. 加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。

　　3. 滴加 5 N NaOH(约 0.2 ml)，调节 pH 值至 7.0。

　　4. 加去离子水将培养基定容至 1 L。

　　5. 高温高压灭菌后，4℃保存。

　　NZYM 培养基

　　组份浓度 0.5%(W/V) Yeast Extract

　　1%(W/V) NZ 胺

　　0.5%(W/V) NaCl

　　0.2%(W/V) MgSO4·7H2O

　　配制方法 NZYM 培养基除不含 Casamino Acid(酪蛋白氨基酸)外，其他成份与 NZCYM 培养基相同。

　　NZM 培养基

　　组份浓度 1%(W/V) NZ 胺

　　0.5%(W/V) NaCl

　　0.2%(W/V) MgSO4·7H2O

　　配制方法 NZM 培养基除不含 Yeast Extract(酵母提取物)外，其他成份与 NZYM 培养基相同。

　　一般固体培养基的配制

　　配制方法 1. 按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭

　　菌前，加入下列试剂中的一种。

　　Agar(琼脂：铺制平板用) 15 g/L

　　Agar(琼脂：配制顶层琼脂用) 7 g/L

　　Agarose(琼脂糖：铺制平板用) 15 g/L

　　Agarose(琼脂糖：配制顶层琼脂用) 7 g/L

　　2. 高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂糖充分混匀(此时培养基温度很高，小心烫伤)。

　　3. 待培养基冷却至 50～60℃时，加入热不稳定物质(如抗生素等)，摇动容器充分混匀。

　　4. 铺制平板(30～35 ml 培养基/90 mm 培养皿)。

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