ELISA试剂盒实验前细节及溶解与稀释过程
 

　　按ELISA试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏 水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。

　　ELISA试剂盒的配制：对于每种细胞因子应仔细阅读说明书，注意每批的细节。在使用细胞因子前，瞬时离心试剂瓶，尽可能多地收回其中的细胞因子。根据每批说明书中的细节，将冻干的细胞因子复溶。 一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml。可利用标准的ELISA操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。为了优化灵敏度，建议孵育标准品和标本。若使用过氧化物酶作为显色系统，应严禁在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物ELISA试剂盒酶的活性。

　　ELISA试剂盒的操作因固相载体的形成不同而有所差异，国内医学检验一般均用板式点。 本文将叙述板式ELISA各个操作步骤的注意要点，ELISA检测试剂盒珠式、管式及磁性球ELSIA，国外试剂均与特殊仪器配合应用。

　　可用作ELISA试剂盒测定的标本十分广泛，体液(如血清 )、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体 或抗原成份。ELISA试剂盒有些标本可直接进行测定(如血清 、尿液)，有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物)。这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。

　　ELISA试剂盒规范品溶解与稀释的正确过程ELISA规范品溶解与稀释的正确过程：

　　1. 粉末规范品时间短离心，让因运送沾到管盖、管壁的规范品沉到管底。

　　2. 依据瓶标签参加必定体积的蒸馏水，加水后轻柔涡旋震动，室温静置溶解 10-30min，让粉末*溶解。留意：加水后暂不必移液枪吹吸，防止蛋白未溶解，枪头带出部分蛋白，待*溶解后可吹吸或涡旋振动混匀。

　　3. 规范品梯度稀释:

　　(1)耗材预备：预备8个1.5Ml离心管，写上S1-S7、空白。

　　(2)规范品稀释液的挑选：若血清、血浆、安排匀浆样本，用试剂盒中的规范品稀释液，梯度稀释规范品。若细胞上清样本，主张用细胞培养基梯度稀释规范品。

　　(3)梯度稀释：依据说明书，每管参加等体积的规范品稀释液(培养基)。汲取同体积溶解好的规范品到S1管中，吹打10次混匀，涡旋5S。从S1管中汲取同体积溶液到 S2管，吹打10次混匀，涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。

　　(4)空白: ELISA试剂盒规范品稀释液(培养基)作为空白即零浓度。留意：梯度稀释规范品时，涡旋震动混匀后可时间短离心，让到盖子、壁上的液体到管底，再开始稀释下个浓度。


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