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　　古朵生物：小鼠甘油三酯试剂盒实验步骤及事项说明书

　　小鼠甘油三酯试剂盒实验操作步骤：

　　实验开始前，各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

　　1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 00μl，余孔分别加标准品或待测样品00μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应20分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

　　2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加 检测溶液A工作液 00μl(在使用前一小时内配制)，酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

　　3. 小鼠甘油三酯温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡-2分钟，大约400μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

　　4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 00μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

　　5. 温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡-2分钟，350μl/每孔，甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

　　6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止)。

　　7. 依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

　　8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后立即进行检测。

　　小鼠甘油三酯试剂盒实验应注意的事项：

　　1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

　　2. 加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)控制在 0分钟内，如标本数量多，使用多道移液器加样。

　　3. 孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

　　4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响zui后的酶 标仪读数。

　　5. 小鼠甘油三酯试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于0μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

　　6. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔0分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

　　7. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。

　　建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

　　如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请zui后乘以稀释倍数。

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