WB实验中蛋白样品的定量方法如何选择?
 

　　实验技术交流第一期内我们通过裂解细胞，组织等步骤已经把蛋白提取出来，但提出来后要怎么知道提出的效果怎么样，怎么才能在同等量上上样。这就需要进行蛋白定量，目前用得最多的定量方法有两种，一种是BCA法，一种是Bradford 法。今天古朵生物技术小编下面我们详细介绍下这两种定量方法的原理与优缺

　　BCA法:

　　BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。其原理是在碱性环境下 蛋白质分子中的肤链结构能与 Cu2+络合生成络合物，同时将 Cu2+还原成 Cu+。BCA试剂可敏感特异地与 Cu+结合，形成稳定的有额色的复合物。在 562nm 处有高的光

　　吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。使用本试剂盒检测灵敏度高，对不同种类蛋白质检测变异系数小，撰作简单。

　　Bradford法:

　　Bradford法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在 465-595 m 处有最大的光吸收值，化合物颜色的深法与管白浓度的高低成正比关系，因此可检测 595 nm 的光吸收值的大小计算蛋白的含量

　　BCA法:

　　优点:

　　1.准确:变异系数远小于考马斯亮蓝染色法(bradford 法)

　　2.线性范围宽，检测灵敏，检测范围: 20-2000 g/ml

　　3.与金属离了、还原剂和整合剂、去污剂兼容性好

　　4.质量检测标准曲线线性关系 R2 值一般为 0.998

　　缺点:

　　与Bradford 法相比不能迅速检测，需要 37*C孵育 30 min。Bradford法:

　　优点:

　　1.与BCA法相比，使用本产品反应迅速，即加即检

　　2.灵敏度范围为 100-1500 ug/ml

　　3.质量检测标准曲线线性关系 R2 值一般 0.980

　　缺点:

　　1.与金属离子、还原剂和合剂、去污剂兼容性差

　　2.精确度没有BCA法高

　　Elisa试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。