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如何评估 ES 细胞合格的胎牛血清?

发布时间:2018-09-19 16:06 点击次数:


胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛;新牛血清取自出生 24 小时之内的新生牛;小牛血清取自出生 10-30 天的小牛

显然,胎牛血清是品质最高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

功能
牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养,具有极为重要的功能。

  1. 提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
  2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
  3. 有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
  4. 是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
  5. 起酸碱度缓冲液作用。
  6. 提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。

如何评估 ES 细胞合格的胎牛血清?
使用 D3 ES 细胞。这是一个对于胎牛血清中生长促进、生长抑制和分化因子非常敏感的细胞系。
  • 相关生长效率分析:
当 ES 细胞以非常低的密度传入包含 10%胎牛血清的生长培养基中,检测开始和支持 ES 细胞克隆的能力。
  • 细胞毒分析:
当以非常低的密度传入包含 30%胎牛血清的生长培养基中,检测 ES 细胞和 feeder 细胞的生长能力。
  • 相关形态学和分化分析:
检测胎牛血清支持未分化 ES 细胞克隆的能力。通过碱性磷 suan 酶活性评估分化程度。未分化的 ES 细胞小颜色深红 fen 红,分化的细胞较大,丰满,颜色较浅。所有的分析在没有 ESGRO 的情况下进行的,培养基中出现 ESGRO 会掩盖由胎牛血清所导致的问题。(ESGRO 或 LIF 经常用来保持 ES 细胞处于未分化状态。)经过培养发现,大约 8 批中有 1 批可以用来培养 ES 细胞。