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细胞支原体污染的影响以及检测方法

发布时间:2018-09-25 15:06 点击次数:

        支原体(mycoplasma):又称霉形体,为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯yi可见的细胞器是核糖体(支原体是原核细胞,原核细胞的细胞器只有核糖体)。
        支原体是在1898年发现的,又称人形支原体,是一种简单的原核生物。其大小介于细菌和病毒之间。结构也比较简单,多数呈球形,没有细胞壁,只有三层结构的细胞膜,故具有较大的可变性。支原体的大小为0.2~0.3um,可通过滤菌器,常给细胞培养工作带来污染的麻烦。菌落小(直径0.1~1.0mm),在固体培养基表面呈特有的"油煎蛋"状。无细胞壁,不能维持固定的形态而呈现多形性,对渗透压敏感,对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。
 支原体污染的来源
         包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。
 支原体污染对细胞的影响
1、影响细胞的生长状态及形态
      支原体可使培液中支持细胞生长的营养物质含量减少,造成细胞生长缓慢甚至停止;细胞状态变差,生长变慢,在显微镜下观察可能会有小黑点,但培养基一般不发生浑浊。会导致细胞微管解聚,引起细胞一系列病变,表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。细胞传代以后就出现细胞间黑点,细胞空泡化,很多类似凋亡、坏死的细胞,最终细胞漂浮,完全死亡。
2.影响细胞的代谢和功能
(1)培液中的精氨酸被支原体大量消耗,引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍;
(2)支原体活动使培养基成分发生改变(如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质),影响细胞代谢;
(3)支原体吸附在细胞表面,破坏细胞膜的完整性,影响细胞信号传递;
(4)支原体消耗细胞的核苷库—染色体异常。
3、其他
      此外,支原体污染还会影响一些病毒在细胞中的产量、使恶性细胞致癌能力下降、影响淋巴细胞分化等。
 
 支原体污染的检测方法
1、培养法
原理是利用营养丰富的培养基,直接对待检细胞、血清等进行支原体培养。
缺点:灵敏度低,试验周期长,不能检测到种且不适用于检测所有支原体。
2、DNA荧光染色法
利用荧光Hoechst33258标记细胞和支原体DNA,在紫外光(波长为630 nm)激发下产生黄绿色荧光,利用荧光显微镜观察支原体是否存在。
缺点:有时易出现假阴性和假阳性
3、聚合酶链反应(PCR)法
    通过扩增被检测标本中的支原体DNA ,再进行琼脂糖凝胶电泳。电泳完毕,将电泳胶在紫外投射仪下观察,根据标准分子量及阳性对照、内对照条带,观察待测样品中是否有阳性条带。