双抗体(原)夹心法，通常是结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。加入酶标记的抗原或抗体，通过反应也结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，根据呈色的深浅进行定性或定量分析。酶的催化效率很高，间接地放大了免癌反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度.

　　双抗夹心法elisa操作步骤：

　　1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品10011，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50叫，混匀;然后从第一孔、第二孔中各取10041分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50叫l，混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50ul弃掉，再各取501分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀;混匀后从第五、第六孔中各取504分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50叫1，混勾后从第七、第八孔中分别取54加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50u，混勾后从第九第十孔中各取50ul弃掉。(稀释后各孔加样量都为50ul，浓度分别为24ug/L，16ug/L，8ug/L,4ug/L，2ug/L)

　　2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品子中先加样品稀释液40叫，然后再加待测样品1041(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及子壁，轻轻晃动混匀。

　　3.温育: 用封板膜封板后置37”C温育30分钟

　　4.配液:将30(48T的20倍) 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 (48T的20倍) 倍稀释后备用

　　5.洗涤:小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干.

　　6.加酶:每孔加入酶标试剂50ul，空白孔,除外

　　7.温育: 操作同3.

　　8.洗涤: 操作同5.

　　9.显色: 每孔先加入显色剂A504l，再加入显色剂B50ul，轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟。

　　10.终止: 每孔加终止液50ul，终止反应(此时蓝色立转黄色)

　　11测定:以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行.

　　双抗夹心法elisa法上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。古朵试剂盒

　　标签：抗原 抗体 酶标试剂 封板膜 显色剂 古朵生物