ELISA试剂盒实验中的封闭液等常用试剂的配制

　　elisa试剂盒实验中的封闭液小知识

　　ELISA的试剂盒说明上写封闭液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封闭空白位点，蔗糖封闭的原理：

　　1、ELISA实验中，蔗糖本身没有封闭作用;

　　2、封闭液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

　　3、加蔗糖的主要目的是保护ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保护剂”的作用。

　　4、蔗糖溶液一般在ELISA板子经过BSA封闭后加，当然也有将蔗糖加到封闭液中同时进行处理;那一种更好需要你实验后来验证。但多数选择前者。封闭剂还可用5%的脱脂乳(市售即可)，0.4%的明胶，但是实验表明前者比较好，后者不容易洗干净未结合上的明胶。

　　封闭剂的原理就是与酶l板上未结合抗原或抗体的微孔中用封闭剂封闭上，结合抗体或抗原的时候就不会产生非特异结合了，不会影响实验的准确度。

　　ELISA实验中缓冲溶液等试剂的配置

　　ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础，ELISA试剂以及各种溶液如何配置?zui近刚做了下ELISA实验，把各种ELISA配置方法汇总如下：

　　(1) ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):

　　NaHCO3 1.59克

　　NaHCO3 2.93克

　　加蒸馏水至1000ml

　　(2) ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS)：0.15M

　　KH2PO4 0.2克

　　Na2HPO4·12H2O 2.9克

　　NaCl 8.0克

　　KCl 0.2克

　　Tween-20 0.05% 0.5ml

　　加蒸馏水至1000ml

　　(3) ELISA实验稀释液：

　　牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

　　加洗涤缓冲液至100ml

　　或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10%使用。

　　(4) ELISA实验终止液(2M H2SO4)：

　　蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。

　　(5) ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):

　　0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml

　　0.1M 柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml

　　加蒸馏水50ml。

　　(6) ELISA实验TMB(四甲基l苯胺)使用液:

　　TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml

　　底物缓冲液(PH5.5) 10ml

　　0.75%H2O2 32μl

　　(7) ELISA实验ABTS使用液:

　　ABTS 0.5mg

　　底物缓冲液(PH5.5) 1ml

　　3%H2O2 2μl

　　(8)ELISA实验封闭液：

　　牛血清白蛋白(BSA) 5克

　　加洗涤缓冲液至100ml。

　　值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉，不适合保存。

　　为了保证ELISA实验的准确性，实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要，将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔，严防交叉污染。

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