推荐产品
公司新闻/正文
古朵小课堂:生物素标记抗体和蛋白使用方法
人阅读 发布时间:2023-08-11 15:00
古朵小课堂:生物素标记抗体和蛋白使用方法
生物素,是一个分子量只有244.31Da的小分子,经活化后可与蛋白、抗体等生物大分子结合,不仅可以很好地保持大分子的生物活性,而且与亲和素结合使用时具有多级放大作用,使其广泛应用于微量抗原、抗体定性、定量检测及定位观察研究。
生物素标记蛋白操作方法:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液(如Tris或者甘氨酸),可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白质量(mg)/蛋白分子量(MW)=蛋白质的毫摩尔数。
2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中,加入足够量浓度的生物素,一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数,对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍,或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室温30分钟,或冰上放置2小时。
4. 用30 ml PBS预洗纯化柱,上样,加入与欲收集量相同的缓冲液,收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。
5. 以280 nm 的吸收值测定蛋白含量。
6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用,可加入叠氮钠、甘油等保存。
那么如何使用生物素标记抗体或蛋白呢?下面古朵生物技术小编给大家分享下:
工具/原料
1. 10ul,50ul,200ul,1000ul可调高精度移液器
2. 恒温箱(37℃)
3. 离心机(离心力可达到12,000×g)
4.生物素标记试剂盒(Cata.No:EBLK0002, Elabscience)
实验前准备
1.仔细阅读使用说明书。
2.计算待使用NH2-Reactive Biotin的量。
3.提前20min从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温(注:不需要用到的NH2-Reactive Biotin继续放置冰箱中)。
4.溶解NH2-Reactive Biotin:加入30ulDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中,静置10min,待其充分溶解,此时生物素的浓度为10mM。
操作步骤:(本操作步骤按照1mg的量进行标记)
1.取1mg待标记抗体于Filtration tube中,并加入相应体积的Labeling Buffer,使抗体的终浓度为2mg/ml,12,000 x g离心10min。(注:①Filtration tube的最大体积为0.5ml②待标记抗体浓度低时,可先超滤离心一次)
2. 加入13.3ul NH2-Reactive Biotin 和适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使终体积为0.5ml,并轻轻吹打混匀。放入37℃恒温箱中避光温育30min。12,000 x g离心10min。
3. 加入适量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,使终体积为0.5ml,并轻轻吹打混匀,12,000 x g离心10min。
4. 操作3重复一次。
5. 加0.2ml Labeling Buffer至Filtration tube中,轻轻吹打。将滤芯倒转放置于另一个离心管中,6,000 x g离心10min。
6. 收集离心管中的溶液,即为生物素标记的抗体。
上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。