推荐产品
公司新闻/正文
古朵技术服务:多重荧光免疫组化技术服务
人阅读 发布时间:2023-08-18 14:42
多重荧光免疫组化技术服务
我该如何得到完美的多色结果呢?
A1:首先,您需要有质量不错的样本和抗体,这就已经是成功的一半(样本、抗体选择攻略),对于样本来说,脱片是我们需要预防的“头号公敌”,多色实验需要重复热修复洗脱抗体多次,假如片子脱片,轻则成像模糊,重则组织脱落前功尽弃,可以在开始实验之前先模拟几轮热修复,不加抗体和其他试剂,看看组织是否有脱落的迹象,如果脱落比较严重,则需要重新制备切片,如果有轻微脱片,则可以考虑购买抗体洗脱液,替代热修复的过程;然后,就可以开始做实验了,我们建议您先进行抗体和染料工作条件摸索,再上多染(参考下图流程),这样多染的成功率可以达到90%以。
最后的10%,就需要调整指标与染料搭配以及染色的顺序了。
Q2:有没有推荐的染料搭配和染色顺序呢?
A2:染料搭配一般遵循“寡靶配强光,众靶配弱光”的原则,意思是表达比较弱的指标搭配荧光信号比较强的染料,表达相对强的指标搭配信号比较弱的染料,Absin的TSA染料波长越短荧光强度越强,比如说需要染PD-1,CD8和CD3,我们手里有一个四色试剂盒(TSA520/TSA570/TSA650),通过IHC发现样本中PD-1的信号很少,CD3信号非常多,其次是CD8,于是选择TSA520搭配PD-1,TSA650搭配CD3,TSA570搭配CD8,比较合理。
接下来就是怎么安排染色先后顺序:
1)划分细胞定位,先外后内:确定每个指标的细胞定位,膜表达先染,胞浆或者胞核的后染(如果是指标比较多的情况下,胞内指标排在比较后面,经过前期多轮洗脱,可以不做细胞通透;如果指标很少,染胞内指标之前还是需要打孔,多个胞内指标也只需要打一次孔);
2)确定抗原修复方式,先酸后碱:碱修复比酸修复的力度会更强,个别抗体在用碱修复以后会染出来很多非特异性,所以如果是相同的细胞定位,就先染酸修复,再染碱修复的抗体;
3)根据IHC结果判别,先弱后强:组化结果显示指标比较少,比较弱的,排在前面染,理论上来说越靠前染的指标效果会越接近单标染色。
以上就是一些通用规则,但不同的指标还是可能出现变化,要想得到最完美的结果,就需要不同的排列组合一个一个尝试(如下表,“X”代表有信号),这样会比较耗费时间和试剂,您可以根据通用规则先行一次多染,然后各通道跟荧光单染做对比,如果效果差别很大,那就再调整染色顺序,如果单染的结果跟组化差别比较大(出现高背景,非特异性明显),就要考虑更换染料搭配。
Target | Best Signal | Recommended Dilution |
||
1st AR | 3rd AR | 6th AR | ||
FOXP3 | x | 1:250 | ||
PD-1 | x | 1:250 | ||
LAG3 | x | x | 1:250 | |
CD4 | x | x | 1:250 |
Q3:我成像完了以后想要做数据分析,你们有什么软件推荐吗?
A3:目前市面上数据分析软件还是比较多的,像免费的您可以下载imageJ、Qupath,缺点就是用法都需要您自行摸索;我们公司安装的是HALO和StrataQuest两款软件,HALO是付费的,StrataQuest是我们TG的扫描仪平台自带的,从功能、分析的精准度和可操作性来说,肯定是大大优于开源软件的,且有软件专业的技术支持团队能够答疑解惑。您可以根据您的实际情况选择合适的分析软件,如果您实在无从下手,也可以找Absin,我们可以提供数据分析的服务~
货号 |
产品名称 |
规格 |
abs50012 |
四色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔二抗) |
20T/100T |
abs50028 |
四色多重荧光免疫组化染色试剂盒(兔二抗) |
20T/100T |
abs50013 |
五色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔二抗) |
20T/100T |
abs50029 |
五色多重荧光免疫组化染色试剂盒(兔二抗) |
20T/100T |
abs50014 |
六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔二抗) |
20T/100T |
abs50030 |
六色多重荧光免疫组化染色试剂盒(兔二抗) |
20T/100T |
abs50015 |
七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(鼠兔二抗) |
20T/100T |
abs50031 |
七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(兔二抗) |
20T/100T |
abs50037 |
七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(plus)(鼠兔通用二抗) |
20T/100T |
abs50038 |
七色多重荧光免疫组化染色试剂盒(plus)(抗兔二抗) |
20T/100T |
标签:抗体 多重试剂盒 染色试剂盒 六色多重试剂盒 古朵生物
试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品,励志研发和销售的综合性生物公司,产品远销多个国家和地区,我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向,不断开发高质量的新产品,提供客户满意的综合服务质量"的方针。