古朵讲解：如何纯化免疫球蛋白G(IgG)
 

　　1.如何纯化免疫球蛋白G(IgG)?

　　免疫球蛋白G(IgG)是血清中免疫球蛋白主成分，约占血清中免疫球蛋白总含量的75%。血浆 B细胞可产生并释放IgG分子，每个IgG具有两个抗原结合位点。

　　IgG包含4种不同的亚型：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，它们的结构类似均由Fab区(上端，抗原结合区)、铰链区和Fc区(下端，Fc受体结合区)组成，在这4种IgG抗体亚型中，IgG1和IgG3与Fc受体的亲和力高于IgG2和IgG4，具有更强的激活抗体依赖的细胞毒性(ADCC)和补体依赖的细胞毒性(CDC)的能力;而IgG2和IgG4亚型与Fc受体的结合力低，其作用主要表现在Fab端的抗原结合能力上，即阻碍或抑制的效应功能。

　　2.如何纯化免疫球蛋白M(IgM)?

　　IgM在Ig中分子量最大，通常称为巨球蛋白，占血清Ig总量的10%。在电子显微镜下观察，IgM由五个基本结构相同的单体组成。各单位间由一条连结链(J链)连结成“星状”的五聚体。

　　IgM是在个体发育过程中最早产生的抗体，也是经抗原刺激的动物体内出现的抗体，主要由脾脏和淋巴结中浆细胞分泌合成。

　　3.如何纯化人免疫球蛋白A(IgA)?

　　IgA在正常人血清中的含量仅次于IgG，占血清免疫球蛋白含量的10~20%。从结构来看，IgA有单体、双体、三体及多聚体之分。市场上由于缺乏合适和高容量的亲和树脂，IgA成为抗体纯化的难题。

　　以下人IgA纯化试剂盒和树脂填料:

　　cat#LT-146KIT 人IgA纯化试剂盒(含微型离心柱)

　　cat#LT-146 人IgA松散树脂5ml

　　cat#LT-146-1x1ml 1mL人IgA纯化预装柱

　　特点：LigaTrap的IgA纯化树脂具有≥15mg IgA/mL树脂的结合能力，远远超过了其他常用于IgA纯化的凝集素树脂的结合力，最重要的是，LigaTrap IgA纯化树脂不需要使用基于糖(半乳糖，蔗糖……)的洗脱缓冲液，因此简化了进一步的下游处理。

　　4.如何纯化鸡免疫球蛋白Y(IgY)?

　　IgY，由两条重链(H)和轻链(L)组成，重链(υ)由一个可变区(V)和4个恒定区(C)组成，没有铰链结构。IgY普遍存在于鸟类、爬行动物和两栖类，在功能上等价于哺乳动物IgG，但其许多生物学性质仍未被发现。

　　近来许多研究者分析了IgY的基因组成和生物学功能，而且证实其为哺乳动物IgG和IgE的直接起源。因为抗原免疫的母鸡所产生的鸡蛋黄中含有丰富的免疫球蛋白IgY，因此，鸡正逐渐成为定制研究抗体来源的常用种属。

　　5.抗体亲和材料——Protein A

　　对于IgG的纯化，除了介绍过的树脂纯化方法，大部分情况下我们都会选择使用Protein A或Protein G进行亲和层析。因为它们对于IgG的Fc段具有特异性的亲和作用，而对于其他杂蛋白没有或者只有很弱的结合。

　　蛋白A (Protein A) (cat#7300-01S,Protein A-UNLB)来源于金黄色葡萄q菌的一个株系，它含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域。Protein A作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性。1个Protein A分子至少可以结合2个IgG。

　　除了IgG，Protein A也可以结合另一些免疫球蛋白，如用于某些种属的IgA、IgM的纯化。重组Protein A的C-端新增一个Cysteine，可以单一位点定向偶联于琼脂糖基架上，降低与抗体接触的空间位阻。

　　6.抗体亲和材料——Protein G

　　对于IgG的纯化，除了介绍过的树脂纯化方法，大部分情况下我们都会选择使用Protein A或Protein G进行亲和层析。因为它们对于IgG的Fc段具有特异性的亲和作用，而对于其他杂蛋白没有或者只有很弱的结合。

　　蛋白G(Protein G)(cat#7406-01S ,Protein G-UNLB)是从G类链球菌(Streptococci)中分离出来的胞壁蛋白，分子量25kDa。相对于Protein A，Protein G对于大多数哺乳动物的IgG有着更高的亲和力，尤其是对于IgG的亚基，如人 IgG3，小鼠IgG1和鼠 IgG2a。

　　因此，Protein G可用于纯化不能与Protein A很好结合的哺乳动物单抗和多抗IgG。

　　7.如何基于磁珠实现分离纯化和富集?

　　Protein A通过共价偶联到磁珠上形成的亲和纯化介质，具有快速磁响应性，高蛋白结合能力和低非特异结合，可与大多数哺乳动物IgG的Fc片段特异性结合。

　　偶联Protein A 的磁珠可快速有效地从腹水、血清或细胞培养液等生物样品中分离和纯化免疫球蛋白，也可通过抗原抗体结合从生物样品中免疫沉淀靶蛋白。通过简单的磁性吸附即可轻松纯化抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。

　　免疫球蛋白G(IgG) 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。