古朵阐述：CCK-8的实验方法与步骤
 

　　实验一：细胞活性检测

　　1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板每孔加入100ul,使待测细胞调密度至(1000-10000)/孔。

　　2. 5%CO2，37℃培养细胞24小时(培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异)。

　　3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，其它情况以此类推。

　　4. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定(一般情况下，白细胞较难显色，因此需要较长的CCK- 8反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，CCK- 8的培养时间一般为1- 4小时，注意：CCK- 8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准)。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

　　5. 在450nm测定吸光度。

　　实验二：细胞增殖-毒性检测

　　1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板每孔加入100ul,使待测细胞调密度至(1000-10000)/孔。

　　2. 5%CO2，37℃培养细胞24小时(培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异)。

　　3. 加入10ul不同浓度的待测物质，将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如6,12, 24或48小时)。

　　4. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，其它情况以此类推。

　　5. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定(一般情况下，白细胞较难显色，因此需要较长的CCK- 8反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，CCK- 8的培养时间一般为1- 4小时，注意：CCK- 8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准)。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

　　6. 在450nm测定吸光度。

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