本产品仅用于科研实验！

　　TWIK相关酸敏感钾离子通道蛋白9抗体

　　规格：以IHC工作液每个样品用量为100ul来计算，按照稀释比例1:400来计算，本试剂盒中一抗规格100ul可以检测400个样品以上。

　　保存：不使用时取试剂盒中一抗保存-20℃，其他均保存 2-8 ℃

　　试剂盒特点：利用LAB-SA第二代技术生产的免疫组化检测试剂，特点是高灵敏度，特异性强、定性定位准确、背景清晰等、低倍景染色，直接滴加，操作方便，孵育时间短，适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片。可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。

　　温馨提示：本检测试剂盒适用于人、大小鼠，兔等绝大多数组织，但对于内源性生物素含量比较丰富的组织(如肾脏、肝脏等)，应选用非生物素检测系统，或用avdin 封闭。

　　产品特点

　　TWIK相关酸敏感钾离子通道蛋白9抗体含试剂：

　　1、一抗(应用：IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 )

　　2、无色试剂：内源性过氧化物酶阻断剂

　　3、试剂A：封闭用正常山羊血清工作液

　　4、试剂B：生物素标记二抗工作液：生物素标记羊抗兔IgG

　　5、试剂C：辣根酶标记链酶卵白素工作液

　　6、显色液D液 (棕色) 1ml

　　7、显色液E液(白色)20ml

　　用户自备试剂：

　　一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)缓冲液：

　　PBS(phosphate buffered solution)即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以。

　　二、柠檬酸钠抗原修复液：

　　可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲q、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

　　抗原修复方法：

　　方法1：沸水浴修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境，保持外部沸腾状态15min，自然冷却至室温。

　　方法2：微波修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中，高火5min，停火3min，中火5min，自然冷却至室温。

　　方法3：高压修复，将盛有修复液和玻片的烧杯置于高压锅，上汽后修复2-5min，然后将高压锅置入凉水中，减压至正常后取出玻片

　　抗原修复注意事项：

　　1)脱蜡水化的切片，应避免因切片干燥，而至非特异性染色。

　　2)热修复操作时务必谨慎，当心烫伤。

　　3)热修复时间过长易导致脱片，请注意控制时间。

　　三、DAB(二氨基联b胺)染色液：

　　过氧化物酶将使底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

　　TWIK相关酸敏感钾离子通道蛋白9抗体实验前准备：

　　安装步骤与维护一)一抗稀释的准备：

　　方法1. 实验前，将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释(或PBS稀释)，将稀释后的抗体分装5-10支(20ulx5支或10ulx10支)，放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反复冻溶。

　　方法2. 实验前,也可将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释50ul(或PBS稀释50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。

　　方法3. 预试验可做几个梯度1：100、200、400背景高还可做上去，选一个适合的稀释比例，再正式做。工作液的稀释-使用抗体稀释液。

　　二)DAB显色液的制备实验准备：在1毫升试剂E(DAB 底物液)中，加入1滴(约50微升)试剂D(DAB浓缩液)，混合均匀，即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配，配好后避光保存，6小时内使用，剩余的液体应弃去。标本显色时间一般为室温 5~20分钟，请在显微镜下观察显色的情况，显色充分后应将标本及时脱水封固。

　　TWIK相关酸敏感钾离子通道蛋白9抗体实验步骤(建议方案)：

　　1、石蜡切片，常规脱蜡至水

　　2、蒸馏水冲洗，pbs 浸泡5 分钟(如需采用抗原修复，在此步骤后进行)。

　　3、3%双氧s去离子水(无色液体)孵育15-20 分钟，以消除内源性过氧物酶活性。

　　4、滴加试剂A(蓝色液体)室温孵育15-20 分钟，倾去，勿洗。

　　5、滴加适当比例稀释的一抗，37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。

　　6、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

　　7、滴加试剂B(黄色液体)，室温或37℃孵育15-20 分钟。

　　8、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

　　9、滴加试剂C(橙色液体)，室温或37℃孵育15-20 分钟。

　　10、PBS 冲洗，3 分钟3 次。

　　11、显色剂显色(DAB 或AEC)

　　12、自来水充分冲洗。

　　13、如果需要，可进行复染，脱水，透明。

　　14、选择适当的封片剂封片。

　　TWIK相关酸敏感钾离子通道蛋白9抗体上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。