什么是质粒转化?如何操作呢?
 

　　一、基本原理

　　将质粒 DNA 导入细菌的过程称为转化( Transformation )。此感受态细菌细胞在 CaCl 2 低渗溶液中膨胀为球状(感受态细菌的制备，见前)。质粒 DNA 与 CaCl 2 形成抗 DNase 羟基 - 磷酸钙复合物黏附于细菌表面，经 42℃ 短时间热冲击处理，促进细胞吸收 DNA 复合物。在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分lie增殖。被转化的细菌中，外源基因得到表达。在选择性培养平板上，可选出所需的转化子(即含有质粒 DNA 的细菌)。钙处理的感受态细胞，一般每微克 DNA 能获得 10 5 ～ 10 6 个转化子。除化学方法转化细菌外，还有电穿孔法( Electroporation )，其转化率可高达 10 9 ～ 10 10 个转化子 /μg 质粒 DNA 。

　　二、实验器材

　　1.培养皿

　　2.恒温培养箱

　　三、试剂

　　1.LB 培养基

　　2.选择性 LB 琼脂培养平板(含氨苄青霉素，终浓度为 50μg/ml )

　　3.氨苄青霉素 100 mg/ml

　　4.宿主细菌：经 100 mmol/L CaCl 2 处理的感受态细菌 DH5α

　　四、操作步骤

　　1、取50μL大肠杆菌感受态细胞，加入适量质粒(体积不得超过4μL)冰浴30min后42℃热激90s ，马上放回冰上，冰浴2min ;

　　2、加400μLLB培养基，于37℃摇床慢摇振荡培养45-60min;

　　3、取50-100μL涂在含有氨苄青霉素(100μg/mL)的LB固体培养基上，37℃倒置培养过夜。

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