实验干货——实验时ELISA竞争法检测抗-HBe
 

　　ELISA方法学在实验中运用的很广泛，5个实验3个实验都是用ELISA法检测的，对于ELISA实验中也是有多种方法学可以选择的，今天古朵生物技术小编着重的讲解下ELISA实验中竞争法检测抗-HBe，先来了解一下实验原理吧!

　　一、实验原理

　　用抗-HBe包被固相载体后，同时加被检血清和合适滴度中和试剂HBeAg，若被检血清中含有抗-HBe，则与包被抗-HBe竞争结合HBeAg，被检标本中抗-HBe越多，HBeAg被结合越多，而与包被抗-HBe结合就越少，加底物后显色就越浅;反之越深。

　　二、主要试剂与器材

　　ELISA试剂盒：内含已包被抗-HBe板条、HRP-抗HBe溶液、中和试剂HBeAg溶液、阳性和阴性对照血清，底物溶液(A液、B液)、终止液、洗涤液。

　　三、结果分析

　　1.P/N≤0.3为阳性。P/N>0.3为阴性。

　　2.P/N=待检血清OD值/阴性对照OD值。

　　四、注意事项

　　1.试剂置2-4℃保存。取用时应先置室温平衡。干包被板条须密封防潮，冻存，取用后余者及时封存。

　　2.恰当选好HBeAg的浓度。

　　3.试剂用前应摇匀。

　　五、操作步骤

　　1.加样：取出干包板条，按编号顺序分别加50μl待检血清、阴性对照血清和阳性对照血清于相应孔中。设空白对照孔，除此孔外，每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl，振荡混匀后，置43℃(或37℃)温育1h。

　　2.洗涤：甩去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20s，甩干。如此重复洗涤4次，在吸水纸上拍干。

　　3.显色：每孔加显色剂A、显色剂B各50μl，振荡混匀后置37℃避光显色10-15min。

　　4.终止：每孔加终止液50μl，振荡混匀。

　　5.酶标仪检测：选用450nm波长，用空白孔调零之后测各孔OD值。

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