标签：琼脂糖凝胶 古朵生物 生物试剂
 

　　琼脂糖凝胶中回收DNA片段的原则及注意事项

 

　　在分子生物学实验中，我们通常需要分离纯化特定分子量的DNA片段，用于接下来的实验，比如酶切、连接的工作。下面主要介绍从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的原则和注意事项，其主要原则有两项：

　　1、去除DNA样品中的杂质：

　　琼脂糖是从琼脂中提取出来的，其中含有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的琼脂糖中含有硫酸酯多糖，这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性，如DNA限制性内切酶、连接酶等，在回收DNA时应尽量减少这些物质的污染。不管用哪种方法进行回收DNA，都会用到2.5 mol/L醋酸铵和乙醇沉淀，再用70%乙醇漂洗数次，这样处理，可以有效地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。近年来琼脂糖的质量大为提高，出现了如低熔点琼脂糖这样的产品，不但熔点降低，其中含有的对DNA工具酶有抑制作用的物质也很少，所以有些低熔点的琼脂糖可以直接在其溶液中对DNA进行内切酶消化和DNA片段之间的连接反应。

　　2、提高DNA片段的回收率：

　　DNA的回收率与DNA片段的大小有一定关系，分子量越大，回收率明显下降，大于20kb时，回收率低于20%。这是由于大的DNA片段和DEAE纤维素纸的结合力强，很难洗脱下来。DNA片段的含量也和回收率有较为密切的关系，量越少回收率越低。

　　回收DNA片段时应注意以下事项：

　　1、提高DNA上样量;

　　2、减小DNA回收时的洗脱容积，若容积过大，可先用正丁chou进行浓缩;

　　3、正确选择回收DNA片段的方法，根据回收片段的大小选择适当的回收方法。

　　琼脂糖凝胶中回收DNA片段的原则及注意事项上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求”的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量”的方针。