上海古朵生物科技有限公司

6 年

手机商铺

商家活跃:
产品热度:

上海古朵生物科技有限公司

入驻年限:6 年

  • 联系人:

    王经理

  • 所在地区:

    上海

  • 业务范围:

    试剂、原辅料包材、技术服务、抗体

  • 经营模式:

    经销商 代理商

在线沟通
推荐产品

公司新闻/正文

提取的核酸浓度太低,满足不了下游实验要求咋办?

人阅读 发布时间:2021-10-09 11:09

我们在进行分子生物学实验的时候,通常会对生物大分子的浓度有一定的要求,比如您要进行转染实验,加入细胞的质粒浓度要求在1 µg/µl,这样才能得到比较高的转染效率。可是您抽提的质粒浓度只有200 ng/µl,这时候该怎么办呢?如何将质粒浓度浓缩到理想的浓度呢?

常用的方法有两种:乙醇沉淀法和离心浓缩法。

乙醇沉淀法:

操作步骤:
1. 估算含有质粒溶液的体积V,加入V/9体积的3M NaAc ,使得NaAc终浓度为0.3M
2. 加入2倍体积的冷无水乙醇,冰上或者-20℃孵育20min
3. 最大离心速度(>13000rpm)离心10min,弃去上清
4. 用75%乙醇洗涤2次
5. 室温晾干
6. 加入适当体积的水或TE buffer 溶解即可
(以上步骤来自分子克隆)

经过一系列的复杂操作,再去做一下核酸定量检测,你往往会发现,浓度比理想的要低很多!这是因为在整个过程中比较容易产生核酸的损失,比如乙醇沉淀步骤没有将核酸完全析出、离心步骤没有完全将核酸完全离心下来、去除上清时不小心将核酸吸出等。

离心浓缩法:
原理:借助于真空离心浓缩仪,将待浓缩的核酸样品放入离心机中,用真空泵提高离心机中的真空度,在低压下核酸溶液的沸点降低,在室温下即可快速挥发以达到浓缩核酸溶液的目的。

操作步骤:
1. 将样品管放入离心机中
2. 设置离心机转速、时间,点击运行
3. 打开真空泵
4. 浓缩结束后取出样品即可

采用离心浓缩法具有更大的优势:
1. 操作简单,避免复杂操作带来样品损失及污染
2. 浓缩速度快,100µl的待浓缩样品浓缩至20µl大约需要40min
3. 成功率高,整个过程核酸分子均在EP管中,避免核酸损失
4. 更好的保护核酸,常温低压下进行核酸浓缩,避免核酸降解
因此,离心浓缩法越来越受到用户的青睐!

上一篇

食用菌的制种菌种的鉴定和保存

下一篇

废弃的化学废液及试剂瓶处理方法

更多资讯

询价列表

暂时没有已询价产品

快捷询价 发送名片
    当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。
    yanxuan

    丁香通研选

    yanxuan

    丁香通小程序

    询价知情同意
    您知悉并同意,丁香通平台展示产品并非为平台自身产品,您发起询价或试用申请后,平台将会把您已提供或按要求提供的相关信息同步提供至所咨询的具体产品商家,由商家为您提供具体产品的价格咨询或产品试用注意事项及相关试用产品或完成相应购买,因此您知悉并授权平台将您的信息进行同步共享。您有权拒绝,但您知悉将无法参加询价或试用活动。