中药标准品HPLC测定标准要求

对于标准品的标化，用HPLC的话只能用面积归一化法了；小编个人觉得用不同的条件肯定会略有差别的，用两个不同的条件分别来测定，这样可以增大可靠性；这就有点像从中草药中提取分离单体化合物一样(不知道你在中草药提取分离方面怎么样?)，一般在分离中草药中的单体化合物时，当你怀疑用一个展开剂跑出来的点是个单体的话，一般你还需要换1-2种完全不同的展开剂进行展开，或者要把硅胶换成聚酰胺或葡聚糖凝胶什么的；如果在变换了各种条件仍然是一个点，那基本就可以确定是个单体化合物了，然后再去打谱确定结构。

使用HPLC(UV检测器)，对一个新药建立含量测定方法，本身这个条件就是在不断的摸索过程中建立起来的；虽然不能说每个方法都对，但只要这个办法满足于各方面的需求，那这个办法就可以使用。

有关中药标准品HPLC测定标准是有不同的说法，这也不难理解，毕竟中药标准品数量众多，不过在这里，上海远慕标准品对照品网的技术人员推荐采用非水滴定法，只要你确定标准滴定液浓度正确，滴定方法得当，就不会有太大问题；我们以前没有标准品时都会用滴定法确定标准品的含量，全部都通过。

对非水滴定法的说法比较赞成；首先要确定你的标准品的含量，至少应该做正相，反相，DAD检测；至于不同仪器，不同实验室间的测试是另外一回事；一般来讲，用HPLC法来测定含量，是需要有对照品的，不管外标法、内标法都需要；而你做的是一类新药，肯定没有对照品；所以，需要有一个方法，作方法学研究；但肯定不能是HPLC法，可以用非水滴定法，用电位指示终点，作出滴定曲线；如果有合适的指示剂，可以比较一下，如果滴定终点电位与指示剂变色终点能够统一，也可用指示剂指示终点；但仍要做线性、精密度、稳定性、回收率等资料；必要时，需要作影响因素、加速、长期试验考察对照品的稳定性。

化药标准品的含量测定首选还是化学法，根据化药本身的性质选方法，是非水滴定、酸碱滴定、电位滴定还是其他。你虽然做的是一类药，但基本的大类你自己应该比较清楚的，参考同类产品的原料含量测定的方法进行方法学的摸索，只要你化学物的性质分析清楚了，应该不是什么问题。

原料含量测定是化学法；现在大家仪器用惯了，总喜欢一开始就用HPLC法；其实大家看看新药研究指南中的内容，原料药首选是化学法的，只有在化学法不能的情况下才用HPLC；要用HPLC就要用到标准品，你本来就是要做化药标准品的含量测定，当然是要用化学法。

药检所的答案也是很官方的；因为你也许也能通过，但是为什么不去自己找一个好的化学法去做含量测定的方法呢？制剂才首选液相方法，你可以用化学法测定自己提纯好的原料药做标准品。标化应该不是测定含量的问题，测定含量的前提就是有对照品，没有对照品的情况下如何保证测定的准确性?如何进行方法评价?

中药标准品HPLC测定标准

标化的过程应该是杂质测定的过程，主要包括(1)HPLC色谱杂质，(2)水分，(3)无机盐，(4)残留溶剂；除去所有杂质的量即可得到对照品的纯度，前面提到的方法在国内尽管可用，但不能称其为标化。一个新药在制定标准品的时候，往往已经有了该新药的质量标准草案；那么，该标准品应首先按照该质量标准做一下全面的质量检查(用到对照品的项目除外)；如果该对照品的精制过程不同于药物的精制工艺，则应针对该精制过程做相应的化学检查，一般的化学杂质应很低。

使用HPLC做纯度分析是必须的，如果不适用，则至少应借助TLC分析其纯度；均应选取完全不同的流动相，证明其杂质是被分开的；HPLC应用二极管检测器测定主峰的纯度，若怀疑有UV不能检测的杂质，则应再选用其他检测器测试一下；如果纯度很高，则可以采用面积归一化法定量；如果有较大杂质，应确定较大杂质的性质及相对响应因子，也可以通过确定最大杂质的量来确定主含量；测定的结果应当与另外一种方法如化学法比对，以验证其正确性。

首先要明白什么叫标化：利用基准物质(或用已知准确浓度的溶液)来确定标准溶液浓度的操作过程，称为“标定”或称“标化”；标准物质的标化虽然没有严格的定义，但其基本意义应该是一致的，如果不知道一个已知含量如何确定未知含量；使用UV检测器可以看做是将分离开(是否真正分离开恐怕DAD的峰纯度检测也无法说明)的物质使用分光光度法测定其吸收度，在没有确定含量的基准物时很难得知被标定物的含量；至于归一化法，如果不是使用通用型检测器(蒸发光，MS)光靠一个UV(包括DAD)首先很难选定测定波长，如果人为因素参预其中，那就不是一个误差可以形容的了；其次流动相的选择，比如甲醇：水，和甲醇：水(缓冲盐)，在这里加入缓冲盐其造成流动相洗脱能力差异有多大，是否如 TLC 中使用三种不同极性的展开剂进行实验那么有说服力。

选用三种方法测定后取其平均值，其统计学意义何在；三种方法的误差来源不同，用三个方法分别测定6次，再取其平均值，是否还需要考察方法的耐用性，不同的人不同天里用不同的方法测定后进行t检验，总之想起来头都痛了；个人认为首先选取一种化学分析法测定其含量，再用HPLC偶联通用型检测器归一化法测定，或者采用内标法测定含量(内标不好选，但也不是不能选)，对这几组数据进行方差分析，判定其是否有差异，也许是一个办法。

　根据小编个人的经验，建议可以在工作的基础上尝试NMR定量法；最常用的HPLC法终归只是面积归一化，是相对含量，对于没有紫外吸收的杂质难以检测；而 NMR可以做到绝对定量，有多少定量质子信号就对应相应的纯物质量；我做过此方面的研究，比较可行，但需根据你化合物的结构选择合适的定量内标和溶剂、适宜的样品浓度、适宜的一组或几组定量质子、多次采样、多次积分、优化驰豫时间等，只是需要做方法学的考察。

中药标准品HPLC测定标准要求及操作方法有很多不同的手法，不管什么手法，最重要的是所测定出来的结果一定要准确，中药标准品含有中药成分，对其操作要求是更加严格了，如有什么其他的建议，欢迎和小编一起讨论哦，后续小编会带来更多关于中药标准品咨讯，敬请期待吧。

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