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进口elisa试剂盒的制备
人阅读 发布时间:2016-11-08 16:22
试剂盒组成
1
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30倍浓缩洗涤液
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20ml×1瓶
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7
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终止液
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6ml×1瓶
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2
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酶标试剂
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6ml×1瓶
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8
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标准品(3200μmol/L)
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0.5ml×1瓶
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3
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酶标包被板
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12孔×8条
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9
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标准品稀释液
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1.5ml×1瓶
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4
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样品稀释液
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6ml×1瓶
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10
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说明书
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1份
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5
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显色剂A液
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6ml×1瓶
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11
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封板膜
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2张
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6
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显色剂B液
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6ml×1/瓶
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12
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密封袋
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1个
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标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
1600μmol/L
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5号标准品
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150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
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800μmol/L
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4号标准品
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150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
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400μmol/L
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3号标准品
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150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
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200μmol/L
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2号标准品
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150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
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100μmol/L
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1号标准品
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150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
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2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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