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古朵推荐:人抗精子抗体(AsAb)试剂盒说明书

人阅读 发布时间:2016-03-29 11:43

    人抗精子抗体(AsAb)酶联免疫分析试剂盒使用说明书(96T)

    本试剂盒仅供研究使用。

    检测范围:3pg/ml-100pg/ml

    使用目的:

    本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中抗精子抗体(AsAb)含量。

    实验原理

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人抗精子抗体(AsAb)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入抗精子抗体,再与HRP标记的抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗精子抗体(AsAb)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人抗精子抗体(AsAb)浓度。

    人抗精子抗体(AsAb)酶联免疫分析试剂盒试剂盒组成

    130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶

    2酶标试剂6ml×1瓶8标准品(200pg/ml)0.5ml×1瓶

    3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶

    4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份

    5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张

    6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个

    标本要求

    1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

    2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

   人抗精子抗体(AsAb)酶联免疫分析试剂盒 操作步骤

    1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

    100pg/ml5号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液

    50pg/ml4号标准品150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液

    25pg/ml3号标准品150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液

    12.5pg/ml2号标准品150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液

    6.25pg/ml1号标准品150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液

    2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

    3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

    5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

    7.温育:操作同3。

    8.洗涤:操作同5。

    9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

    10.终止:每孔加终止液50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    注意事项

    1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

    2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

    3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

    4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。

    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

    6.底物请避光保存。

    7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

    8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

    9.本试剂不同批号组分不得混用。

    保存条件及有效期

    1.试剂盒保存:;2-8℃。

    2.有效期:6个月

    上海古朵生物技术有限公司主营产品/服务:elisa试剂盒,免疫组化试剂盒,放免试剂盒,标准品,血清,抗体,培养基,生物试剂!人抗精子抗体(AsAb)酶联免疫分析试剂盒 ELISA试剂盒,种属标本齐全,有专门针对人血清、血浆、全血、分泌物、尿液、细胞培养上清液、组织匀浆、组织液等标本的试剂盒;另有针对各种动物(鼠、兔、牛、马、鸡、猪、狗、山羊、猴、鱼)的科研试剂。欢迎广大客户来电来函!

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