丁基-琼脂糖凝胶 4FF使用方法

产品名称：丁基-琼脂糖凝胶 4FF
性状：白色微球,凝胶状，保存在20%酒精溶液中
凝胶类型：疏水层析填料
结构成分：4%交联琼脂糖
粒径： 45-165um
工作PH值：2-14（短时间）;3-13（长时间）
操作温度：4-40℃
配基密度：30μmol/mL
保存条件：4～25℃密闭保存
应用：疏水层析介质，快流速，适合生物大分子和疫苗的分离纯化等。
外观：本品为白色球状凝胶，无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

操作步骤
1 装柱
（1）让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2 平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。

3 上样
（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。

4 洗脱
疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

5 再生
一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

6 在位清洗
（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
（2）对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH 去除。
（3）对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异丙醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。

7 注意
在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。

8 去热源
用0.5M的氢氧化钠清洗柱子5~6小时或用0.1M的氢氧化钠24小时。或用以下方法步骤去除：
（1）2倍柱体积的70%乙醇；
（2）2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH5；
（3）1倍柱体积4M尿素；
（4）3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl；
上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。

9 消毒 用0.5~1M NaOH室温下洗8~10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。