Heidenhain铁苏木素染色液注意事项

产品名称：Heidenhain铁苏木素染色液
规格：4X100ml
分类：HE染色
储存条件：未开封无菌缓冲液4℃情况下，6个月保质期。-20℃12个月保质期
用途：常规切片HE染色
注意事项：自然氧化1个月成熟,以硫酸铁铵作为氧化剂和分化剂,应在显微镜下控制分化程度,直到出现所需结构。染色时间一般在1个小时。


简介：Heidenhain铁苏木素染色液:Heidenhain铁苏木素染色液产品简介：苏木素(Hematoxylin)和伊红(Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学和组织学生物实验中常用的一种染色方法。苏木 精为碱性天 然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的主要成分是DNA，在DNA的双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木 精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。

Heidenhain铁苏木素染色液以硫酸铁铵作为氧化剂和分化剂，根据不同的分化程度可显示不同的结构。染色后所有成分均为黑色或深灰黑色，不同组织结构的苏木素着色可被Heidenhain分化液以不同的速度进行性褪去，黑色褪去顺序依次为：线粒体、横纹肌、核染色质。

染色原理：
1、细胞核染色的原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中，两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

2、细胞浆染色的原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关。当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点(4.7～5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。

3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用1%盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。

4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。

操作步骤(仅供参考)：
1、切片脱蜡至水
①二甲苯作用。
②(可选)无水乙醇作用。
③95%的乙醇④90%的乙醇
⑤80%的乙醇
⑥自来水或蒸馏水冲洗

2、染色
①HeidenhainDifferentiation媒染(见注意事项1)
②蒸馏水冲洗(见注意事项1)
③Heidenhain铁苏木素染色液染色
④自来水冲洗
⑤（可选步骤）伊红复染液染色
⑥HeidenhainDifferentiation分化或用蒸馏水1:1稀释HeidenhainDifferentiation分化，并与自来水冲洗交替进行，显微镜下观察分化程度。(见注意事项2)
⑦自来水冲洗

3、脱水、透明、封固
①80%乙醇②90%乙醇
③95%乙醇作用。
④无水乙醇作用。
⑤二甲苯透明。
⑥中性树脂封片。
染色结果：线粒体、横纹肌、髓磷脂、染色质等呈灰黑色。


注意事项：
1、HeidenhainDifferentiation媒染时间和Heidenhain铁苏木素染色液染色时间根据不同的固定液而异。一般情况下，媒染和染色时间控制在1h即可，参考时间为：福尔马林、Bouin固定液、Carnoy固定液1h，Helly、Zenker等重铬酸盐固定液3h，四氧化锇、Flemming固定液24h。
2、显微镜下控制分化程度，直到出现所需观察的结构。若分化过度，可用苏木素重染相同时间并重新分化。亦可用蒸馏水2:1稀释HeidenhainDifferentiation后再进行分化，以便更好控制分化程度。
3、切片分化后应彻底冲洗洗掉所有分化液，组织不易褪色。
4、胞浆复染(伊红或橙黄G)可突出核染色质，尤其在显示染色体或有丝分裂更有效，本试剂提供了伊红复染液，但不是必需步骤。
5、切片脱蜡应尽量干净。
6、系列乙醇应经常更换新液。
7、冷冻切片染色时间尽量要短。8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。