DEAE-Dextran细胞转染试剂盒操作步骤

中文名称：DEAE-Dextran细胞转染试剂盒
英文名称：DEAE-Dextran Transfection Kit
产品规格：200T
储存条件：-20℃，有效期12个月。
用途：转染DNA到细胞中

本试剂盒是一种适合于把DNA转染到培养的真核细胞中的转染试剂盒。对于六孔板而言，一个包装的本转染试剂如使用常规方法可以转染2500个孔，如使用预处理方法可以转染200个孔。

试剂盒组分：
DEAE-Dextran溶液————20ml
10×PBS—————————20ml
氯喹溶液————————3.5ml

关于DEAE-dextran的细胞转染方法早在1968年就有相关论文发表。DEAE-dextran可以促使DNA结合到细胞膜上，然后通过内吞作用(endocytosis)进入细胞。基于DEAE-dextran的细胞转染方法适用于瞬时转染(transient tranfection)，但不适用于筛选稳定表达细胞株。DEAE-dextran在较高浓度作用较长时间会对细胞产生一定毒性。

目前基于DEAE-dextran的细胞转染方法有两种，一种方法为把DNA和DEAE-dextran混合后加入到细胞中，另一种方法为先用DEAE-dextran预处理细胞，然后再加入DNA。后一种方法是在前一种方法的基础上经过改进而产生的，对于一些细胞包括Hela、COS、NIH3T3和KB细胞等，后一种方法可以增加细胞对DNA的摄入量，显著改善转染效果。氯喹的加入可以抑制溶酶体对外源DNA的降解，从而提高转染效率。但对于具体的细胞、具体的培养条件，如需获得更加理想的转染效率，必须自行摸索上述各种转染方法，找出优化的转染方法。

基于DEAE-dextran的细胞转染方法不仅可以转染贴壁细胞，也可以转染悬浮细胞。转染效率可以通过转染表达EGFP或其它荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。

注意事项：
1. 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用百奥莱博的质粒大量抽提试剂盒(YT003)进行抽提，以保证获得较高的转染效率。
2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
3. 试剂盒中各试剂均经过无菌处理，可以直接使用。在细胞转染过程中要严格注意无菌操作。
4. 需自备用于洗涤的PBS或HBSS，以及用于稀释10XPBS的无菌水。
5. 稀释或配制DEAE-Dextran溶液或DNA的1XPBS可以用试剂盒中提供的10XPBS稀释。
6. 氯喹溶液对人体有害，请注意适当防护。

储存条件：4℃，有效期1年。