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细胞冻存管应如何解冻? 可能原因有?

发布时间:2018-08-08 16:00 点击次数:

细胞冻存管应如何解冻? 可能原因:
(1)胰蛋白酶消化过度
(2)支原体污染
(3)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当
(4)细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)

接种细胞起始浓度太低或太高 解决办法:
1. 准备一个培养容器,内装合适体积的适宜培养基,并使其温度和pH与建议的相称 。
2. 在37℃或该细胞系正常生长温度水浴下通过轻柔摇动迅速溶解冻存管(约2分钟);
3. 管中内容物溶解后立刻将冻存管移到超净工作台内,并用70%酒精消毒表面防止污染,注意无菌操作。
4. 拧开冻存管盖,将管中内容物转移到已装有少量培养液的无菌离心管中稀释,离心(一般125g,10分钟),弃去上清并用1~2ml完全培养基重新悬浮沉淀细胞,然后转移细胞悬浮液到培养容器内混合均匀。注意:如果冻存液中含5% DMSO,则不必离心,只需用15ml培养液悬浮即可。因为DMSO在这个浓度时没有毒性。
5.24小时后检查培养情况,如果需要的话进行扩传。有些细胞系(比如杂交瘤细胞)从冻存状态恢复需要几天时间。 实际上,一些杂交瘤细胞在第一天培养液中出现死亡细胞并产生许多细胞残骸。许多细胞冻存后活力下降并在融化后24小时到一个最低状态。此后细胞将恢复并进入对数生长期。细胞复苏过程不是很难,主要是速溶这步很关键。再有,细胞复苏的状态如何,较大程度上取决于细胞冻存时的操作。还有一点,细胞也是有思想的,你对他好,关心他照顾他,他也不会让你失望的。