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苏木素伊红(HE)染色液的染色原理

发布时间:2018-08-03 15:49 点击次数:

        苏木素(Hematoxylin)和伊红( Eosin)染色,简称HE 染色,是病理学常规制片中最基本的染色方法,应用机器广泛。苏木精是从原产中南美的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶,是一种碱性染色剂,它在被氧化后生成苏木素,同媒染剂(常用的是三价的铝或盐铁)一起使用,能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中,常用HE 染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察。对于确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分,而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE 染色组织切片的基础上进行的。在HE 染色的组织切片中,细胞核呈蓝色,细胞浆呈红色,二者形成鲜明的对比,易于观察分析。苏木素伊红染色试剂盒中,苏木素染色液采用进口的高纯度苏木精、硫酸铝钾、甘油等组成,不含氧.化.汞、甲醇等有害物质,对细胞核染色效果好。其特点:长期保存,不易产生沉淀和金属; 应用范围广,可以用于人、动物、畜牧、水产等领域,可以用于组织石蜡切片、冰冻切片和组织细胞的染色等;苏木素染色液可以重复使用。
 
染色原理:
1、细胞核染色的原理:
     苏木素为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA 双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
 
2、细胞浆染色的原理:
     伊红是一种化学合成的酸性染料,在一定条件下可使细胞浆着色。细胞浆的主要成分是蛋白质,为两性化合物,细胞浆的染色与染液的pH 值密切相关。当染液的pH 值在胞浆蛋白质等电点(4.7~5.0)以下时,胞浆蛋白质以碱式电离,则细胞浆带正电荷,就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合,使细胞浆着色,呈现红色。
 
3、分化作用:
     染色后,用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去,这个过程称为分化作用,所用的溶液称为分化液。在HE 染色中常用1%盐酸乙醇作为分化液,因酸能破坏苏木素的醌型结构,使组织与色素分离而退色。经苏木素染色后,必须用1%盐酸乙醇分化,使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去,再进行伊红染色,才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
 
4、返蓝作用:
     分化之后,苏木素在酸性条件下处于红色离子状态,呈红色;在碱性条件下处于蓝色离子状态,呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色,故分化之后,立即用水除去组织切片上的酸而中止分化,再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色,这个过程称为返蓝作用或蓝化作用。另外用自来水浸洗也可使细胞核返蓝,但所需时间较长。
 
注意事项:
1、切片脱蜡应尽量干净。
2、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇应经常更换新液。
3、1%的盐酸乙醇分化液的分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和1%的盐酸乙醇分化液的新旧而定,另外分化后自来水冲洗时间应该足够,以便彻底清洗酸。
4、yi醚-乙醇混合固定液是由yi醚和95%乙醇等量混合而得,再加入适量乙酸,密闭保存。
5、冷冻切片染色时间尽量要短。
6、促蓝液常使用0.2~1%氨水水溶液或Scoot 促蓝液或0.1~1%碳酸锂水溶液。
7、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8、使用场所应通风,并远离火源。