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荧光素酶报告基因检测方法与Western-Blot检测方法在细胞信号转导通路调控机制研究中的区别

发布时间:2018-08-02 10:05 点击次数:

荧光素酶报告基因简介:
       Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统。然后可以通过荧光测定仪也称化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系,可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法。

Western-Blot检测方法简介:
western blot中转移在膜上的蛋白处于变性状态,空间结构改变,因此那些识别空间表位的抗体不能用于western blot检测。这种情况可以将表达目的蛋白的细胞或细胞裂解液中的所有蛋白先生物素化,再用酶标记亲和素进行western blot。实验中取胶和膜需带手套。

荧光素酶报告基因检测方法与Western-Blot检测方法在细胞信号转导通路调控机制研究中的区别

1、荧光素酶报告基因检测是测定上游刺激对下游靶基因在转录水平的影响,即对靶基因mRNA表达水平的影响,可以通过实时荧光定量PCR来验证;Western blot是测定上游刺激对下游靶基因对应的蛋白表达水平的影响,特别是磷酸化程度的改变。因此,两方面的实验结果可以结合起来更细致、更全面地揭示细胞信号转导调控的分子机制。

2、荧光素酶报告基因检测方法操作过程相对简单,检测灵敏度较高;Western blotting操作过程繁琐,检测灵敏度较低。

3、荧光素酶报告基因检测只需要成功将含有目标DNA序列插入到报告载体中,即可进行后续实验,Western blotting则需要购买商品化的一抗,一般价高量少,且抗体的杂交条件需要摸索;若自制的一抗,抗体效价需要验证,实验周期较长。