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人苗条素受体血清(LR/Ob-R)ELISA试剂盒的操作步骤

人阅读 发布时间:2018-07-30 13:45

      标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl ,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到 第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各 取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul ,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标 准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别 加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度 分别为1800ng/L,1200ng/L ,600ng/L,300ng/L, 150ng/L)。
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在 酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍 干。
加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
温育:操作同3。
洗涤:操作同5。
显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟 以内进行。

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