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进口elisa试剂盒的制备
人阅读 发布时间：2016-11-08 16:22
试剂盒组成
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1
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30倍浓缩洗涤液
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20ml×1瓶
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7
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终止液
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6ml×1瓶
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2
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酶标试剂
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6ml×1瓶
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8
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标准品（3200μmol/L）
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0.5ml×1瓶
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3
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酶标包被板
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12孔×8条
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9
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标准品稀释液
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1.5ml×1瓶
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4
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样品稀释液
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6ml×1瓶
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10
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说明书
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1份
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5
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显色剂A液
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6ml×1瓶
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11
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封板膜
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2张
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6
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显色剂B液
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6ml×1/瓶
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12
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密封袋
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1个
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标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
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1600μmol/L
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5号标准品
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150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
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800μmol/L
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4号标准品
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150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
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400μmol/L
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3号标准品
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150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
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200μmol/L
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2号标准品
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150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
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100μmol/L
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1号标准品
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150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
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2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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