主要用途
冰冻切片神经纤维免疫荧光染色（PGP9.5）试剂是一种旨在使用PGP9.5 单克隆抗体免疫荧光染色技术，分析存档中的冰冻组织切片中神经纤维的形态、分布（innervation）和密度（intensity）状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种动物（包括小鼠、大鼠、羊、兔、狗、猪等）和人体组织（皮肤、汗腺、子宫内膜组织等）的外周神经纤维退化、再生和缺失分析。广泛用于糖尿病并发症、子宫内膜移位症、淀粉样变性和肌萎缩性脊髓侧索硬化症等疾病引起的神经变性的评估研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。
技术背景
神经纤维（nerve fiber）是神经细胞的延伸，由轴突（axon）和髓鞘（myelin）构成，存在于中枢和周围神经系统，分为髓鞘化和非髓鞘化。中枢神经系统有锥体束（pyramidal tract）、锥体外束（extrapyramidal tract）和上行束（ascending tract）。周围神经系统含有感觉（sensory）、运动（motor）和自主（autonomic）神经纤维，分成A（大型且髓鞘化）、B（小型且髓鞘化为自主型）、C（小型但非髓鞘化）三组，其中A 组又分成Aα（输入或输出且感觉和运动型）、Aβ（输入或输出且感觉和运动型）、Aγ（输出且感觉和运动型）、Aδ（输入且感觉型）。而C 型纤维具有疼痛、温度、触觉、压力、刺痒等感受能力。糖尿病并发症diabetesmellitus）、子宫内膜移位症（endometriosis）、淀粉样变性（amyloidosis）、肌萎缩性脊髓侧索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis；ALS）等疾病将引起神经变性病变（neuropathies），尤其是小型神经纤维。蛋白基因产物9.5（protein gene product 9.5；PGP9.5），又称为泛素羧基末端水解酶-1（ubiquitin C-terminalhydrolase；OCH-L1），广谱性表达在所有中枢和周围神经纤维上。通过使用抗PGP9.5 单克隆抗体的免疫荧光技术，定量或定性检测皮肤、子宫内膜、汗腺等活检组织神经纤维的形态、分布、密度和完整性变化（例如表皮内神经纤维密度intraepidermal nerve fiber density；IENFD、汗腺神经纤维密度sweat gland nerve fiberdensity；SGNFD），来诊断分析周围神经系统的早期神经病变。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
固着液（Reagent B） 毫升
封阻液（Reagent C） 毫升
抗体液（Reagent D） 毫升
荧光液（Reagent E） 毫升
抗淬灭液（Reagent F） 微升
产品说明书1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；抗体液（Reagent D）和荧光液（Reagent E）严禁反复冻融； 荧光液（Reagent E）和抗淬灭液（Reagent F）避免光照；有效保证6 月
用户自备
2
盖玻片：用于封片孵育
培养箱：用于组织细胞染色孵育
荧光显微镜：用于组织细胞荧光观察
实验步骤
一、组织准备
取出3 毫米活检组织（皮肤、汗腺、子宫内膜等），固定处理24 小时后，进行切片：10 至60 微米厚度，常规使用50 微米厚
二、免疫染色处理
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1． 准备好待测的厚为50 微米的冰冻切片
2． 小心加上xx 微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
4． 小心加上xx 微升－20℃预冷的固着液（Reagent B），铺满整个切片样品表面
5． 置于－20℃冰箱里孵育20 分钟
6． 小心移去切片上的固着液（Reagent B）
7． 空气中晾干
8． 加上xx 微升清理液（Reagent A），铺满切片样品表面
9． 室温下孵育2 分钟
10．小心抽去清理液（Reagent A）
11．加上xx 微升封阻液（Reagent C），铺满切片样品表面
12．置于37℃培养箱里孵育30 分钟，保持湿润
13．小心抽去封阻液（Reagent C）
14．加上xx 微升抗体液（Reagent D），铺满切片样品表面
15．盖上盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30 分钟（注意：避免气泡）
16．小心移去盖玻片，抽去抗体液（Reagent D）
17．加上xx 微升清理液（Reagent A），铺满切片样品表面
18．置于37℃培养箱里孵育5 分钟，保持湿润
19．小心抽去清理液（Reagent A）
20．重复实验步17 至19 二次
21．加上xx 微升荧光液（Reagent E），铺满切片样品表面
22．盖上新的盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30 分钟，避免光照（注意：避免气泡）
23．小心移去盖玻片，抽去染色液（Reagent E）
24．加上xx 微升清理液（Reagent A），铺满切片样品表面
25．置于37℃培养箱里孵育5 分钟，保持湿润
26．小心抽去清理液（Reagent A）
27．加上xx 微升抗淬灭液（Reagent F）
28．盖上盖玻片或封片
29．即刻在荧光显微镜下观察3
荧光液（Reagent E）
荧光染料异硫氰酸荧光素（FITC）
荧光颜色绿色
激发波长488
散发波长530
作用神经纤维显示
冰冻切片神经纤维免疫荧光染色（PGP9.5）试剂盒 古朵生物
30．计算神经纤维密度
1） 低倍镜（100X）确定阳性区域，设定为1 平方毫米
2） 高倍镜（400X）计数阳性区域的神经纤维数
3） 计算：
神经纤维总数/阳性区域总数（每平方毫米）
注意事项
1． 本产品为10 次操作量
2． 在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
4． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
5． 孵育时，须避免光照
6． 建议组织细胞染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
7． 本公司提供系列神经纤维染色试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定荧光清晰